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cck8试剂实验过程中的疑难解答(一)
发布时间:2018-03-12 点击次数:1010次
对于cck8试剂的使用相比于多用户都充满了疑惑,在实验的过程中也经常会遇到一些难题,寸步难行,今天呢小编就总结下实验中客户常见问题相关疑问解答供大家参考下吧
1.cck8试剂与胸苷结合检测之间是否有相关性?
有。然而,请注意由于cck8试剂使用的检测原理与胸苷检测的不同,因此结果可能不同。
2.cck8试剂能否检测细菌细胞?
可以检测E.coli,但不能检测酵母细胞。向100 μl E.coli培养液中加入10 μl cck8试剂溶液,并培养1-4个小时或guo夜。
3.cck8试剂稳定吗?
cck8试剂在0-5℃下能够保存至少6个月,在-20℃下避光可以保存1年。如果需要长期保存,我们推荐-20℃的储藏条件。
4.如果没有450 nm的滤光片,还可以使用哪些其他滤光片?
还可使用450 nm到490 nm之间的滤光片。
5.如何减少由于cck8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差?
可以在加样前用培养基稀释cck8试剂并混匀后加样。
6.cck8试剂是什么颜色?
应该是粉红色。若颜色不一样,有可能会影响测定。
7.CCK8能否对活细胞进行染色?
不能。因为CCK8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST8),并通过电子载体1Methoxy PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST8上。由于生成的甲ā也是高度水溶性的,因此CCK8不能对细胞进行染色。
8.CCK8检测溶液对细胞是否有毒?
CCK8溶液自身因为高浓度的1Methoxy PMS的存在而具有一点毒性。但是,加到培养基中的CCK8是没有毒性的,因为被稀释了10倍。因此,长时间的培养,如隔夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK8检测后还可以用于其他细胞增殖检测,如结晶紫检测,中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK8的耐受力都不同,因此在需要进行长时间培养时,先检测一下细胞在加入CCK8培养后的活力。
9.在做加药实验时,药物对测定是否有影响?如何解决?
有时会有影响。如果药物具有还原性,会和CCK8发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK8,测定450 nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加CCK8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK8之前更换培养基,去掉药物的影响。
10.每次测定的数值不一样,是什么原因?如何解决?
可能会有以下几个原因: 1. 当在培养箱内培养时,培养板zui外一圈的孔zui容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。 一般情况下,zui外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。 2. 有可能会因为CCK8沾在壁上而产生误差,建议在加入CCK8后,轻轻敲击培养板以帮助混匀。 3. 每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000100,000个/孔范围内摸索条件。
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